HLA抗原的檢測
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（一）HLA-A、B、C抗原的檢測
HLA-A、B、C抗原可用血清學方法鑒定，故又稱SD抗原（serologically defined antigen）,常采用微量淋巴細胞毒性試驗（microlymphocytotoxicity test）,又稱補體依賴細胞毒試驗（complement dependent cytotoxicity,CDC）。基本步驟是分離純化外周血中的淋巴細胞，加一組已知HLA抗血清，20℃60分釧后，再加家兔補體，37℃60分鐘后加臺盼蘭染色觀察結果，如淋巴細胞染成蘭色則為陽性，表明待檢淋巴細胞表面具有與已知抗血清相應的抗原。也可用51Cr標記的細胞毒試驗。
（二）HLA-DR、DQ抗原的檢測
HLA-DR、DQ抗原檢測的基本方法是采用微量淋巴細胞毒性試驗。先從待檢者外周血中分離純B細胞，陽性血清可來自經產婦，但需用血小板吸收以除去抗HLA-A、B、C抗體。標準抗血清的主要有以下幾種來源。
（1）經產婦血清：在多胎生產的婦女中，可得到抗HLA-A、B和C抗原的抗血清。因為胎兒的HLA抗原包含了父方抗原（因其中一個單倍體來自父方），在分娩時，由于胎盤損傷等原因，胎兒的父方抗原免疫了母方，從而在母體內產生抗HLA抗血清，這種抗血清可能具有多種特異性，但多胎后，其中免疫原性最強的一種抗原可刺激誘導得到單一特異性抗血清。
| （2）計劃免疫志愿者的血清：給志愿者注射不相容的HLA淋巴細胞，受者產生特異性HLA同種抗體，可用于HLA-A、B、C、DR和DQ分型。 |
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（3）單克隆抗體：至今報道的大都是經種間免疫（鼠抗人）獲得，小鼠免疫系統(tǒng)識別人HLA抗原所產生的鼠抗人單抗不同于從經產婦獲得的HLA抗血清，HLA抗原分子最易為鼠免疫系統(tǒng)識別的暢敘有種間送別的決定簇。
所以應用鼠雜交瘤技術獲得HLA單抗大部分都是識別種間差異的共同決定簇，所謂單態(tài)性HLA單抗。已獲得數百種HLA單抗中，僅少數為多態(tài)性HLA-A、B、C單抗。而在已獲得的多態(tài)性單抗中也集中某幾個少數的特異性抗原，要獲得多數特異HLA單抗有賴于人-人雜交瘤技術的應用。第11次IHW報道用克隆的HLA等位基因轉染小鼠L細胞，獲取特異HLA抗原專一表達相應產物的轉染細胞（transfactent）以篩選相應的HLA單克隆抗體。現已從70多個轉染細胞中獲得抗HLA多態(tài)部分的單抗約50多種，特別針對難以檢出的DP以及部分DQ抗原的單抗，這些細胞和基因工程產生的制劑具有精細的分辨力，有助于確定各種HLA等位基因產物的結構和各人群特異性抗原的檢測和分析。
（三）HLA-D抗原的檢測
以往HLA-D抗原用混合淋巴細胞培養(yǎng)（mixed lymphocyte culture）來鑒定，故又稱LD抗原（lymphocyte defined antigen），有雙向MLC和單向MLC兩種分型法。
1.雙向MLC?供者和受者淋巴細胞在體外共同孵育時，由于Lads抗原不同而相互刺激轉化為母細胞。供者和受者組織相容性愈差，相互刺激也愈強，轉化率就愈高。雙向MLC缺點是操作方法復雜，穩(wěn)定性與重復性差，一般要5-7天，對尸體供腎者多無法預先測定。
2.單向MLC 屬于陰性分型法，基本步聚是將已知HLA-D抗原的淋巴細胞用絲裂霉素C（mitomycin C）或X線照射處理，成為只有抗原激發(fā)能力而無增殖反應能力的“刺激細胞”。將刺激細胞與末經過這種處理的待測淋巴細胞進行混合培養(yǎng)，根據待測細胞出現母細胞反應的程度，則可知待測淋巴細胞上是否具有與“刺激細胞”上相同的HLA-D抗原。在MLC起激發(fā)抗原的主要是B細胞和單核細胞上的D抗原，反應細胞為CD4陽性T細胞。本法特點同雙向MLC。在單向MLC中作為刺激細胞最好用純合子配型細胞（homozygous typing cell,HTC）,因為純合子是兩個單體型完全相同，因此只有一種D抗原。
純合子分型細胞的來源：
（1）姨姑表婚配的子女約占1/16的機率找到純合子細胞。
（2）多發(fā)性硬皮病患者中表現為HLA-D2和HLA-B7連鎖不平衡的個體具有異常高的純合子頻率。
（3）風濕性關節(jié)炎患者D位點純合的發(fā)生率也較高。
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（四）HLA-DP抗原的檢測
HLA-DP抗原的檢測可采用預處理淋巴細胞分型試驗（primed lymphocyte typing test,PLT）基本步驟是首先取有一個單倍體相同的兩個個體的淋巴細胞進行混合培養(yǎng)，這在雙親與子女間很容易找到，如親代a/b,子代a/c。先將a/c經X線照射作為刺激細胞，則反應細胞a/b只對c單倍體抗原起反應。經9-14天混合培養(yǎng)，反應細胞分裂增殖逐漸停止，最后培養(yǎng)中留下已致敏的記憶細胞，稱為預處理細胞或PLT分型細胞，液氮保存。當被檢者淋巴細胞含c單倍體抗原，則預處理細胞表現一種迅速的回憶反應，在24-30小時內迅速發(fā)生增殖。因此本法屬于陽性分型法。
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